2 x M7 Max Super Mix (Dye Plus)
貨號：Cat.No: M7005 Size：5 X 1ml
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品包括通過基因改造技術(shù)實現(xiàn)快速擴(kuò)增和超?保真的 DNA 聚合酶，延伸速度可達(dá) 4 kb/min。同時含 有 dNTPs、Mg2+、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、PCR 反應(yīng)的穩(wěn)定劑等，濃度為 2×。由于使?的超?保真 DNA 聚 合酶具有極強(qiáng)的 3' → 5' 外切酶活性，與普通?保真酶相?，保真性更?，是普通 Taq DNA Polymerase 的 100 倍以上。DNA 擴(kuò)增時，只需加?模板、引物和?，使 SuperMix 溶液的濃度為 1× 即可進(jìn)?反應(yīng)。 擴(kuò) 增產(chǎn)物為平端，可直接?于?縫克隆實驗。同時，反應(yīng)產(chǎn)物可直接上樣，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測。本產(chǎn)品 包含紅?電泳指示劑，指示帶在 1% 瓊脂糖凝膠中的遷移速率與 1.5 kb 雙鏈線性 DNA 相當(dāng)。
適?范圍：
1. 超?保真 PCR 快速擴(kuò)增，平端克隆，?縫克隆實驗，基因定點(diǎn)突變。
2. 低豐度模板、復(fù)雜模板或富含 GC/AT 模板的擴(kuò)增。
3. ??段擴(kuò)增
產(chǎn)品特?
? 減少 PCR 操作時間
? 避免因多步操作帶來的污染
? 優(yōu)化的緩沖液，可?于低豐度模板、復(fù)雜模板或富含 GC/AT 模板的擴(kuò)增
? 基因組 DNA ?段的擴(kuò)增(≤15 kb)
? Plasmid DNA ?段的擴(kuò)增(≤15 kb)
? 熱啟動，?特異性
操作說明
推薦 PCR 體系（以 50ul 反應(yīng)體系為例）
| 名稱 | 體積 | 終濃度 |
| 2 X M7 Max Super Mix (Dye Plus) a | 25ul | 1 X |
| 10 μM Forward Primer | 1ul | 0.2 uM |
| 10 μM Reverse Primer | 1ul | 0.2 uM |
| PCR-grade Water | As Required | - |
| Template b | As Required | As Required |
| 總體積 | 50ul | - |
a.使?時徹底融化、混勻。 b.不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，下表為 50 ul 體系推薦的模板?量:
| 模板種類 | 模板起始量 |
| 基因組 DNA | 10 - 400 ng |
| 質(zhì)粒 DNA | 10 pg - 5 ng |
| 病毒 DNA | 10 pg - 10 ng |
| cDNA | 1 - 5 ul |
PCR 條件
| Step | Temperature | Duration | Cycles |
| Initial Denaturation | 98°C | 30 sec | 1 |
| Denaturation | 98°C | 10 sec | 25-35 |
| Annealing c | 55-65°C | 30 sec | 25-35 |
| Extension | 72°C | 15-30 sec/kb | 25-35 |
| Final Extension | 72°C | 5 min | 1 |
c. 推薦使?退?溫度 60°C。
保存條件
-20 保存，有效期 24 個?。
保存條件常?問題與解決?案
? ?產(chǎn)物或產(chǎn)物量少
1) 重復(fù)實驗避免加樣錯誤
2) 優(yōu)化引物設(shè)計
3) 設(shè)置退?溫度梯度，優(yōu)化合適的退?溫度
4) 使??純度模板并適當(dāng)增加模板?量
5) 適當(dāng)增加延伸時間
6) 增加循環(huán)數(shù)? 35 - 40 個循環(huán)
7) 增加 Mg2+ 濃度? 3-4mM
? 有?特異性擴(kuò)增產(chǎn)物或彌散條帶
1) 設(shè)置退?溫度梯度，優(yōu)化合適的退?溫度
2) 降低引物濃度?終濃度為 0.2 μM
3) 優(yōu)化引物設(shè)計
4) 適當(dāng)減少延伸時間
5) 減少擴(kuò)增循環(huán)數(shù)? 25 - 30 個循環(huán)
6) 使??純度模板并適當(dāng)減少模板?量
